Manipulations préalables

• Diluer la suspension cellulaire à analyser dans dilueur adapté (sérum physiologique etc…). Attention cependant à ne pas oublier de multiplier le résultat final du comptage par le facteur de dilution choisi. La dilution idéale permet d’obtenir 10 cellules par rectangles.
• Poser la cellule sur une  surface plane.
• Placer la lamelle de la cellule sur la lame de verre sur la zone contenant le quadrillage, la coller en humidifiant les 2 bords de  celle-ci, ou la maintenir en place. Remettre en suspension les cellules à compter.
• Grâce à une pipette Pasteur ou une micropipette, déposer une goutte entre la lamelle et la cellule. La capillarité permettra l’entrée du liquide dans l’espace entre la cellule et la lamelle. Remplir l’espace entre les rigoles.
• Attendre que les cellules sédimentent pendant 5   minutes avant de réaliser le comptage.

Comptage des cellules

• Observation au microscope (objectif x10).  Une mise au point est requise pour visualiser le quadrillage de la cellule de Malassez.
• Observation au microscope (objectif x40) et comptage des cellules présentes dans les rectangles quadrillés verticalement et horizontalement.  Chaque rectangle correspond à un volume de 0,01 mm3.

Calcul du nombre de cellules par  ml

N x d =  n / V

N : nombre d’éléments par ml ; d :  coefficient de  dilution,  n nombre d’éléments comptés , V volume de comptage correspondant au nombre de rectangles comptés.

Nettoyage de la cellule après utilisation

• Plonger la cellule dans un bain de javel diluée pendant 10 à 15 minutes.
• Rincer à l’eau du robinet puis à l’eau distillée.
• Essuyer à l’aide d’un papier absorbant non pelucheux sans frotter.
• Laisser sécher à l’air libre pendant quelques minutes.
• Ranger à l’abri des poussières.